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- CTF-LTM 2D荧光细胞活力检测试剂盒

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CTF-LTM 2D荧光细胞活力检测试剂盒
产品描述 描述 细胞活力检测有多种方法,如检测染料排除,ATP浓度变化,酶活性变化等。细胞检测有时需要进行细胞毒性的机制研究和/或设立内参对照,由此产生多重(multiplex) 分析需求,即对同一样品用多种分析方法检测,彼此检测机理不同,相互不干扰,如此可以进行相关对比,从而揭示细胞毒性的机制或排除系统差异。国外 CellTiter Fluor (CTF)类产品就是基于这样的原理设计的。本公司自行研发推出了同类的荧光细胞活力检测试剂盒(Fluorescent Cell Viability Assay Kit),性能上与国外品牌产品无明显差异。本产品是基于活细胞内的蛋白酶对多肽-荧光基团底物产物的降解,产生荧光信号。细胞膜完整性受损时,该蛋白酶就失去了对底物的降解活性,不会产生荧光信号。CTF-LTM与荧光素酶试剂盒检测原理不同,检测方法也不同,其检测灵敏度次于荧光素酶法,但是可以检测到更早期的轻微的细胞损害,两个检测相容性好,可以进行multiplex 检测。
产品特性:
1、性能
检测信号,Window,灵敏度与特异性与国外品牌同类产品类似。
2、相容性
与CTG等常用分析试剂相容,不形成相互影响。
3、特征
对细胞早期膜损伤更敏感。
4、便捷
“加入-混合—温育-检测",整个实验步骤简单,易操作。
产品组成:
蛋白酶底物,缓冲液混合后灌装于 10 mL 或 100 mL 的棕色瓶中及 2 ml 管中,规格如下:规格 CTF底物 CTF缓冲液 可检测的 96-孔板孔数 可检测的 384-孔板孔数 10mL 100uL 10mL 100 500 2×50mL 2×500uL 2×50mL 1000 5000 使用方法 1、细胞准备:
(1)在 96 孔或 384 孔细胞培养板铺合适密度的待检测细胞。建议使用黑板(如与发光试剂联合使用,可选择白板)。
(2)准备待检化合物。将合适浓度的待检测化合物加到细胞板孔中。培养液中有机溶剂浓度保持在1~2%以下。设立未加化合物的对照组。根据项目需求继续培养合适的时间。
2、细胞活力检测:
(1)取出 CTF-LTM细胞活力检测试剂,CTF缓冲液wan全溶解后平衡至室温。CTF底物涡旋振荡使其che底混匀,瞬时离心收集CTF底物至管底 。
(2)配制CTF反应液:CTF底物为100x,根据用量用CTF缓冲液配成1x反应液,充分混匀。
(3)取出待测细胞培养板,每孔加入等体积的CTF反应液,例如100μl培养液加入100μl 1x CTF反应液 。
(4)低速振板20 秒混匀,避光37 ℃ 反应60min 后进行荧光检测 。不同细胞对CTF底物切割速度不同,最佳读板时间需根据细胞优化。最快可以在加入试剂30分钟后进行读板。一般在60分钟或更长时间后读板的结果信噪比更高。建议读板时间最长不超过3hr。
(5)在荧光读板仪上读取荧光信号,激发光Ex 380-400nm,发射光Em 505nm。
(6)根据需要,继续进行下游的多重分析,例如Caspases 3/7 细胞凋亡检测。注意事项 1、初次使用后建议将底物分装-20℃保存,每次新鲜配制反应液。
2、非经严格验证,不建议随意改变反应试剂用量。基本信息 储存/保存方法 -20℃及以下避光储存,有效期12个月。实验结果图5000细胞/孔的Hela 细胞接种于96孔白板透明底培养板,加不同浓度的多西zi杉醇进行处理。65小时后取出,进行序贯荧光细胞活力检测-CTG细胞活力检测,所用体积是60ul medium-60ul荧光检测试剂-60ul CTG检测试剂。以未加药物处理的反应孔读数为100%,计算药物处理孔percent reading,作图求得IC50. 左图与右图分别是国外同类品牌产品及CTF-LTM的荧光检测结果,两种检测方法IC50相当。HEK 293细胞计数,分于96孔培养板板,每孔细胞数如表中所示。按产品说明书分别用CTF-LTM2D荧光细胞活力检测试剂盒及国外同类品牌PC产品进行荧光细胞活力检测,图中读数代表两个重复60分钟读数的均数。结果提示两个试剂盒检测灵敏度类似。A549分别接种于白色和黑色透明细胞板,每孔1.5e+04 细胞,100μL 培养基。24hr后加入化合物STSP(Staurosporine ),最高浓度1μM, 3x稀释,八个浓度, 溶剂DMSO终浓度1%,24hr后进行检测: 黑色板用于CTF荧光细胞活力检测,按CTF-LTM 2D荧光细胞活力检测试剂盒说明书进行,加入试剂后60min/100min/120min Ex380/Em505读板, 白色板用于细胞活力CTG检测,按CTG-LTM 2D细胞活力检测试剂盒说明书进行,加入试剂10min/30min/60min 后读板 剂量曲线见上图:爱必信 CTG 和CTF两种方法测得STSP对A549细胞EC50相符。CTF-LTM 2D荧光细胞活力检测试剂盒温馨提示:本产品仅作科研实验使用,不支持临床等研究



