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- 流式绝对计数微球
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流式绝对计数微球
产品描述 描述 流式细胞术细胞计数分析能够快速地量化细胞的特征，绝对细胞计数微球现在广泛应用于细胞计数实验以及疾病进展研究中，尤其是干细胞研究领域。此产品的单一包装瓶内含精确染有荧光染料的荧光微粒，它具有最佳的荧光强度并在多通道(FITC、PE、PE-Cy5)具有宽的发射光谱。亲水性的微粒表面可消除二聚体的产生，保证了由分析过程验证过的计数的准确性，以及流式细胞仪的绝对计数的可靠性。
获取绝对细胞计数一般通过两种方法，一种是将来自细胞分析仪器中检测的细胞浓度与流式细胞术细胞计数分析的细胞群数据相结合（多平台检测），另一种向流式细胞样品中加入内部微球计数标准品（单平台检测）。单个平台检测方法十分简单，避免实验室间差异，从而更加准确、利用荧光参比微球进行细胞绝对计数是目前临床及科研工作者广泛认可的流式细胞仪单平台绝对计数方法之一。应用 T 淋巴细胞绝对计数，CD34+造血干细胞绝对计数，网织红细胞绝对计数，循环肿瘤细胞绝对计数等浓度 6.4x107微粒/ml ± 5%
使用方法 样本要求：
1、用肝素抗凝采血guan采集200uL以上样本。
2、样本要存放于室温且避免震摇，血液采集后24小时内使用。
3、样品染色后避光保存于2-8℃，24小时内上机检测。
4、样本如有微生物污染、脂血、凝血及细胞活力不佳，则应避免使用，除非样本具有不可替代性，请在结果报告时标注。
需自备的材料：
1、血细胞分xi用溶血剂j
2、流式抗体试剂
3、肝素抗凝采血guan
4、量程范围适用于20uL、100uL、1mL的移液器及一次性吸头
5、涡旋振荡器
6、流式细胞仪
操作步骤：
1、采用反向移液技术吸取50uL混匀的样本，加入绝对计数guan底部，移液器前端避免接触管底，避免血液碰到管壁上部。
2、在流式管底部加入一定量的流式抗体试剂。
3、盖上管帽，轻轻涡动混匀约3秒钟，室温避光反应25分钟。
4、向管内加入450uL血细胞分xi用溶血ji，盖上管帽，轻轻涡动混匀约15秒钟，室温避光反应10分钟。免洗，待检。
5、轻轻涡动混匀约10秒钟，上机检测。
下面以正常成人外周血样本、CD3-FITC/ CD8-PE/ CD45-PerCP / CD4-APC荧光单克隆抗体试剂盒（流式细胞仪法）为例示范分析方法。
首先，建立CD45/SSC散点图，淋巴细胞群显示为CD45高表达，SSC低表达，用不规则门圈出，见图1：
图1：CD45/SSC散点图中圈出淋巴细胞门
其次，选择显示淋巴细胞门内细胞，设置CD3/SSC散点图。圈出CD3+，见图2。
图2：CD3/SSC散点图中圈出CD3+淋巴细胞
选择显示淋巴细胞门内细胞，设置CD3/CD4散点图四象限门。CD3、CD4双阳细胞即为CD4+T淋巴细胞，见图3。最后，选择显示全部细胞，设置CD3/CD8散点图，圈出绝对计数微球，见图4。
图3：CD3/CD4散点图设置四象限门 
图4：CD3/CD8散点图圈出绝对计数微球 如果未使用绝对计数的自动软件，可用以下方程式人工计数：
淋巴亚群绝对数(cells/uL)=（区域内淋巴亚群细胞数×微球标示值）/（区域内绝对计数微球数×样本体积）储存/保存方法 2-30℃保存，切勿冷冻，有效期5年。
技术指标 成分 多重荧光染色聚苯乙烯微球 微球大小 5 um 颜色 绿色荧光（488/525 nm） 红色荧光（535/575 nm） 近红外荧光（635/660 nm） 浓度 6.4×107微粒/ml±5% 密度 1.05 g/cm³ 均一度 CV＜3% 添加剂 0.05% tween-20分散剂/表面活性剂，2mM防腐剂 注意事项 1、切勿冷冻。
2、使用前超声震荡10S效果zuijia。研究领域 研究领域 Drug DiscoverySmall Molecule DrugLead Compound Discovery流式绝对计数微球温馨提示：本产品仅作科研实验使用，不支持临床等研究