一、试剂准备：
MTT 溶液的配制：用 5mL MTT 溶剂溶解 25mg MTT，配制成 5mg/mL 的MTT 溶液。在无菌环境下，用 0.22µm 过滤后使用，或适当分装后-20°C 避光保存，保存期为半年，在2~8°C 避光保存 2 周。

二、操作流程：
1、实验所用细胞应为对数生长期细胞。检测时，应设置 MTT 溶剂对照孔（不含细胞）。
2、用分光光度计在 690nm 处测量 96 孔板的背景吸光度值。
3、通常细胞增殖实验每孔加入 100µL 2000 个细胞，细胞毒性实验每孔加入100µL 5000 个细胞(具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定)。按照实验需要，进行培养并给予 0~10µL 特定的药物刺激。
4、每孔加入 10µL MTT 溶液，在细胞培养箱内孵育 4h。
5、孵育结束后，从培养箱中取出细胞，每孔加入 100µL 甲瓒溶解液。在细胞培养箱内继续孵育，期间可用加样枪吹打帮助溶解。直至甲瓒全部溶解。通常 37°C 孵育5~10min 左右。注：加入甲瓒溶解液后，1h 之内读板。
6、用分光光度计在 570nm 测定吸光度。所测的值减去 690nm 处测得的背景吸光度值，即为实际吸光度值。

1、由于使用 96 孔板进行检测，如果细胞培养时间较长，一定要注意蒸发的问题。一方面，由于 96 孔板周围一圈最容易蒸发，可以采取弃用周围一圈的办法，改加PBS，水或培养液；另一方面，可以把 96 孔板置于靠近培养箱内水源的地方，以缓解蒸发。
2、MTT 溶剂在低温情况下会凝固，使用前请室温放置或 20-25°C 水浴温育片刻至全部融解后使用。
3、MTT 配制成溶液后为黄色，需避光保存，长时间光照会导致失效。当颜色变为灰绿色时，请勿使用。MTT 溶液在 2~8°C、冰浴等较低温度情况下会凝固，可以20-25°C 水浴温育片刻至全部融解后使用。
4、甲瓒溶解液结冻或产生沉淀时可以 37°C 水浴孵育以促进溶解，并且必须在全部溶解并混匀后使用。
5、细菌、支原体或其他微生物可破坏 MTT 四唑环，污染的细胞不能使用该方法进行检测。
6、加入甲瓒溶解液时，高蛋白含量的样本可能会形成沉淀。样本的蛋白浓度相当于10%胎牛血清（4mg 蛋白质/mL 样品）是可以接受。含高蛋白浓度的血清或血清产品需要稀释后检测。
7、含有酚红的培养基和盐溶液可提高的背景吸光度值，降低灵敏度。

MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit,MTT kit

2~8℃，避光保存，有效期12个月。