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- 快速内切酶BspQI
- 快速内切酶BspQI
产品描述 描述 快速内切酶BspQI属于 Type IIS 型限制酶,识别非回文序列,并在识别序列之外进行切割,常用于Golden Gate组装。经过优化的反应 Buffer使BspQI最大限度发挥功能,同时反应缓冲液包含重组白蛋白,其可增强多种酶的稳定性。
识别位点:
5'...C G T C T T C (N)1↓...3'
3'...G C A G A A G (N)4↑...5'
同裂酶:SapI, LguI, PciSI
注:同裂酶对于不同的甲基化修饰可能具有不同敏感性。建议反应条件:
1× HN 缓冲液;
50℃温育;
参照“DNA 酶切流程"配制反应体系。
失活条件:
80℃温育 20 min
产品组成:组分 规格 BspQI (10 U/μl)
50ul 10× HN Buffffer
1ml 质量控制:
超长时间温育检测 :
最适反应温度下,将 10 U BspQI 与 1 μg λDNA 共同温育 3 h,未检测到其他核酸酶污染或星号活性引起的底物非特异性降解,延时酶切可能出现星号活性。
酶切-连接-再酶切检测:
最适反应温度下,使用10 U BspQI消化底物,回收酶切产物。在22℃下使用适量T4 DNA Ligase (Fast)可以将酶切产物重新连接。将连接产物再次回收后,使用相同的内切酶可以重新切开连接产物。
DNase 残留检测:
将10 U BspQI与双链DNA底物在 37℃温育 16 h,通过 DNA电泳检测双链DNA底物无变化。使用方法 1、DNA 酶切流程
(1)在冰上按如下建议的加样顺序配制反应体系:a. DNA 底物中应不含氯仿、乙醇、EDTA、洗涤剂或高浓度盐,否则将会影响 BspQI 酶活性;ddH2O up to 50ul 10× HN Buffffer 5ul 底物 DNAa 1ug BspQI (10 U/ul) 1ul Total 50ul
(2)轻柔吸打或轻弹管壁以混匀(切勿涡旋),然后瞬时离心以收集挂壁液滴;
(3)50℃温育 15 min~1 h;(4)80℃温育 20 min 即可使酶失活,停止反应,或者通过吸附柱或氯仿纯化终止反应。
2、注意事项
(1) 反应体系中加入的酶体积不应超过总体积的 10%,避免酶中过多的甘油引起星号活性;(2)限制性内切酶存储缓冲液中的添加剂 ( 例如甘油、盐 ) 与底物溶液中的污染物 ( 例如盐、EDTA 或乙醇等 ) 相同,反应体积越小,酶切反应抑制效应越强。
不同 DNA 中的酶切位点数量甲基化修饰影响λDNA ΦX174 pBR322 pUC57 pUC18/19 SV40 M13mp18/19 Adeno2 10 1 1 1 1 0 0 7 Dam Dcm CpG EcoKI EcoBI 无影响 无影响 无影响 无影响 无影响 储存/保存方法 -20°C 及以下运输及保存,长期保存建议放 80°C 。有效期2年。温馨提示:本产品仅作科研实验使用,不支持临床等研究