- 核酸转染试剂盒
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产品描述 描述 产品介绍：
该产品是我司在Plasmid Transfection Reagent的基础上进一步研发成功的专门用于核酸高效转染的试剂盒。它具有非常zhuo越的转染性能，可高效转染绝大多数贴壁细胞，转染效率可高达90%以上（Hela细胞，EGFP质粒）。其功能强大，不仅可高效转染较大分子的质粒DNA，还可高效转染mRNA、siRNA、mimics和各种小分子DNA。与目前市场上常见的脂质体转染试剂不同，该试剂盒采用生物可降解材料配制，对细胞的毒性很低，转染后24小时细胞几乎无明显死亡。它使用也非常方便，先将转染试剂与质粒DNA混合，再将转染试剂-DNA复合物直接加入培养细胞中，血清不影响其转染效果，不必刻意添加或更换培养液，操作十分简便。它适合于贴壁细胞的核酸转染，如需转染原代细胞，请选择原代细胞核酸转染试剂盒（abs60324）。如需转染悬浮细胞，请选择悬浮细胞核酸转染试剂盒（abs60325）。
产品特点：
1、zhuo越的细胞转染性能：可高效转染多种贴壁细胞，转染效率在贴壁细胞中可高达90%以上；
2、转染功能强大，不仅可高效转染大分子质粒DNA，还可高效转染mRNA、siRNA、mimics和各种小分子DNA；
3、极低的细胞毒性：使用可降解生物材料，细胞毒性低，转染细胞死亡率不到10%，大大降低了因细胞毒性对实验结果的影响；
4、操作简便，可用于含血清培养基培养细胞的转染，转染前后不需要更换培养液。试剂盒组分
货 号 试剂A 试剂B Trans buffer S abs60259-0.5mL 0.4 mL 0.5 mL 15 mL abs60259-1.0mL 0.8 mL 1.0 mL 30 mL abs60259-1.5mL 1.2 mL 1.5 mL 45 mL 使用方法 操作步骤：
一、质粒DNA转染（以24孔板转染为例）:
A、细胞接种:
1、转染前一天对细胞进行转接，每孔接种0.8-1.2×105个细胞，使转染时细胞密度为90%左右，且生长良好（非常重要）；
2、最好在转染开始之前更换新鲜的含血清培养基，以防转染后孵育阶段细胞密度太大、营养不足导致细胞死亡。
B、试剂B /DNA转染复合物制备(该步完成后应立即进行转染):
1、在1.5 mL无菌离心管中加入30 uL Trans buffer S，再加入适量的转染试剂，见附表。用移液器轻轻混匀后在室温静置5分钟。
2、在1.5 mL无菌离心管中加入30 uL Trans buffer S，并加入适量的试剂A，轻轻混匀，再加入适量的DNA，见附表。用移液器再次轻轻混匀后在室温静置5分钟。
3、 将DNA-Trans buffer S混合物滴加至试剂B-Trans buffer S混合物中，用移液器轻轻混匀后在室温静置15分钟，立即转染。注意： 试剂B-Trans buffer S混合物和DNA-Trans buffer S混合物的混合次序非常重要，切勿颠倒。
注意：离心管最好使用聚丙烯离心管。
C、转染:
1、将步骤B制备的转染复合物滴加至培养基中，边加边轻轻晃动培养板以使复合物均匀分布。加完后，立即将培养板转入培养箱继续培养。
2、培养12小时后即可观察，最佳观察或收获时间为24-48小时。
3、试剂B在wan全培养基中仍有较高的转染效率，因此转染前后不需要换成无血清或低血清培养基。二、siRNA转染（以24孔板转染为例）:
A、 细胞接种:
1、转染前一天对细胞进行转接，使转染时细胞密度为30-50%左右，且生长良好、无支原体污染（非常重要）；
2、 最好在转染开始之前更换新鲜的含血清培养基，以防转染后孵育阶段细胞密度太大、营养不足导致细胞死亡。
B、试剂B /siRNA转染复合物制备 (该步完成后应立即转染):
1、 在1.5 mL无菌离心管中加入30 uL Trans buffer S，并添加适量的转染试剂(见下表) 。用移液器轻轻混匀后在室温静置5分钟。
2、 在1.5 mL无菌离心管中加入30 uL Trans buffer S，并添加适量的siRNA（见下表），用移液器轻轻混匀后在室温静置5分钟。
3、将siRNA-Trans buffer S混合物滴加至试剂B-Trans buffer S混合物中，用移液器轻轻混匀后在室温静置15分钟后，立即转染。
C、转染:
1、将步骤B制备的转染复合物滴加至培养基中，边加边轻轻晃动培养板。加完后，立即将培养板转入培养箱继续培养。
2、37°C培养24-72小时，检测基因抑制效果。如果需要，细胞培养4-6小时可以更换培养基，但不是必须。
3、 试剂B 在wan全培养基中仍有较高的转染效率，因此转染前后不需要换成无血清或低血清培养基。储存/保存方法 -20°C 保存，使用前请轻轻混匀；有效期1年。技术指标 附表 1：质粒转染不同培养体系推荐初始转染条件
培养皿 96 孔板 48 孔板 24 孔板 12 孔板 6 孔板 10cm 皿 培养基、试剂、DNA量 Trans buffer S (uL) 2x6 2x15 2x30 2x60 2x120 2x600 试剂A (uL) 0.4 1.0 2.0 4.0 8.0 40 试剂B (uL) 0.5 1.3 2.5 5.0 10 50 1 ug/uL plasmid (uL) 0.16 0.4 0.8 1.6 3.2 16 wan全培养基(mL) 0.10 0.25 0.50 1.0 2.0 10 附表 2：siRNA 转染不同培养体系推荐初始转染条件
培养皿 96 孔板 48 孔板 24 孔板 12 孔板 6 孔板 10cm 皿 培养基、试剂、DNA量 Trans buffer S (uL) 2x6 2x15 2x30 2x60 2x120 2x600 试剂B(uL) 0.4 1.0 2.0 4.0 8.0 40 siRNA (pmol) 4 10 20 40 80 400 wan全培养基(mL)
0.10 0.25 0.50 1.0 2.0 10 产品用途 可高效转染绝大多数贴壁细胞，转染效率可高达90%以上（Hela细胞，EGFP质粒）。试剂A功能强大，不仅可高效转染较大分子的质粒DNA，还可高效转染mRNA、siRNA、mimics和各种小分子DNA。注意事项 1、shou次转染，请务必进行优化实验，如24孔板质粒转染，每孔质粒用量0.8 ug， 试剂B 可选择2.0 uL、2.5 uL、3.0 uL、3.5 uL进行优化。24孔板siRNA转染，试剂B 用量2.0 uL，siRNA用量可选10 pmol、20 pmol、30 pmol、40 pmol进行优化。
2、进行质粒转染，接种细胞的数量应以确保转染时的细胞汇合度在80-90%为准，过高或过低均会影响转染效率。进行siRNA转染，接种细胞的数量应以确保转染时的细胞汇合度在30-50%为准。
3、试剂A仅用于质粒转染，RNA或siRNA转染不需加入试剂A。
4、 请注意质粒转染和siRNA转染时对细胞密度和转染试剂用量等条件的差异，不要混用同一条件。
5、如果需要质粒稳转，请在转染24-48小时后加入筛选培养基。
6、 本产品适合于质粒DNA、siRNA分别独立转染，如需质粒DNA、siRNA共转，请选用核酸共转染试剂盒。
本产品仅用于科学研究，不得用于医学临床用途。温馨提示：本产品仅作科研实验使用，不支持临床等研究