准备细胞：
1、检查并确认细胞没有真菌、细菌、支原体污染。
2、冻存前的细胞处于对数生长期最佳。
3、计数待冻存的细胞数量。悬浮细胞应 180g 离心 5~10min 后除去培养基，贴壁细胞应消化后计数，再 180g 离心除去培养基以获得细胞沉淀。
细胞冻存：
1、首先确定细胞适宜的冻存密度和体积，计算应使用的本冻存液体积。
注意：可使用的冻存密度为 2~40×106 /ml，最佳密度为 4~20×106 /ml。冻存体积为 0.25~1ml/管，推荐冻存体积为 0.5ml/管。
2、吸取适量 冻存液 重悬细胞，立即分装至细胞冻存管。
3、立即将冻存管移入-80℃低温冰箱，不能采取任何程序降温措施或使用程序降温装置。如果无法立即移入-80℃低温冰箱，至少应当先移入 0℃以下环境中（如-20℃冰箱）短暂存放 10 min 左右，同样不能采取程序降温。冻存液重悬后的细胞不能在室温或 2~8℃静置超过 10 min 以上。
4、-80℃冰箱过夜后的冻存管，要立即移入液氮中储存，不可于-80℃长期冻存。
细胞复苏：
1、先准备室温或 37℃预温的基础培养基，其体积为冻存液体积的 15~30 倍。
2、取出液氮中的冻存管，置于 37℃水浴并不断轻摇。待剩余 1 粒米大小的冰块时，迅速移出水浴。3、立即用基础培养基稀释细胞悬液，轻柔吹打 3~5 次混匀。然后，180g 离心 5~10 分钟，获得细胞沉淀备用。
4、加入适量新鲜培养基，使用移液管缓慢悬浮细胞，并将细胞转染细胞培养皿/瓶中，显微镜下观察细胞状态，放入细胞培养箱中培养。
5、24h 后观察细胞状态，并更换新鲜细胞培养液。
