本产品包含Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液,浓度为2×。具有快速简便、灵敏度高、特异性强、稳定性好等优点,可最大限度的减少人为误差。使用时只需加入DNA模板和引物既可。
本产品使用方便快捷,能避免 PCR 操作过程中的污染,使用时只需取适量
2×Taq PCR Mix溶液,加入模板和引物,并加入去离子水补足体积,使 PCR Mix溶液浓度为1×即可进行反应。使用前请保证充分溶解并混匀,操作需在冰上进行。
本产品有含红色染料,使用含染料的产品在 PCR 反应完成后,不需添加上样缓冲液即可直接 上样进行电泳;也可经过纯化处理,以用于酶切、连接、荧光测序等后续操作。
使用方法(用户需自备的试剂:DNA 模板、引物。 操作示例:以20 µl PCR反应体系为例):
按照下表配制 PCR 反应体系
组分 | 体积 |
DNA模板 | 1ul |
正向引物(10um) | 0.4ul |
反向引物(10um) | 0.4ul |
2×Taq PCR Mix | 10ul |
ddH2O | 补足至20ul |
2. PCR 反应循环的设置
流程 | 温度 | 时间 |
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预变性 | 94℃ | 2min |
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变性 | 94℃ | 30s | 25-32循环 |
退火 | 55-65℃ | 30s |
延伸 | 72℃ | 60 s/kb |
终延伸 | 72℃ | 5-10min |
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注:模板量:10-1000 ng 基因组 DNA,1-30 ng 质粒,或 1-2 μl RT-PCR 反应后的 cDNA。 注 : 以上举例为常规 PCR 反应系统 , 仅供参考。实际反应条件因模板、引物等的结构不同而各异 , 需根据模板、 引物、 目的片段的特点设定最佳反应条件,并根据比例放大或缩小反应体系。
3. 结果检测:取 2 μl 反应液电泳观察结果。含染料产品可直接上样电泳,无染料产品需添加上样缓冲液后进行电泳。