3μM

悬浮细胞： 
（1）收集悬浮细胞2×105 ~1×106个细胞，通过离心（通常300-500×g，5分钟）沉淀细胞，弃上清； 
（2）加入1mL预冷PBS重悬细胞沉淀，再次离心洗涤，去除残留的培养基和其他杂质；
（3）（可选）使用4%多聚甲醛（PFA）或其他固定剂，在室温下固定细胞5-15分钟。然后用PBS清洗细胞2次，每次5分钟，去除未结合的固定剂，对于保持细胞形态和结构特别有用。
（4）通过离心沉淀细胞，弃上清，加入1mL DAPI 染色液，轻轻混匀后，室温避光孵育 5-15 分钟。
（6）流式细胞术上机检测（通常不需要清洗，多余的染色液不会显著影响数据质量）；如果使用荧光显微镜观察细胞，建议用PBS洗涤细胞2-3次以去除多余的DAPI染色液，在载玻片上滴一滴抗淬灭封片介质，覆盖盖玻片，避免产生气泡。使用配备有 UV 或蓝色激发光源（358 nm 左右）的荧光显微镜观察，DAPI 的发射光谱峰值约为 461 nm，呈现亮蓝色荧光。
贴壁细胞：
（1）（可选）使用4%多聚甲醛（PFA）或其他固定剂，在室温下固定细胞5-15分钟。然后用PBS清洗细胞2次，每次5分钟，去除未结合的固定剂，这一步骤非常重要，因为残留的固定剂可能会影响后续染色的效果。
（2）（可选）使用通透化试剂（如 0.1% Triton X-100）来破坏细胞膜，在室温孵育5-10分钟，使抗体或其他染料更容易进入细胞内部。然后用PBS再次清洗细胞3次。
（3）吸去最后一次洗涤用的PBS，滴加适量的 DAPI 染色液，轻轻摇晃以确保均匀覆盖所有细胞。室温避光孵育5-15分钟。 
（4）孵育结束后，用PBS轻轻洗涤细胞2-3次，以去除多余的DAPI染料。注意不要过度洗涤以免损伤细胞或造成染料脱失。
（5）使用荧光显微镜观察细胞，在载玻片上滴一滴抗淬灭封片介质，覆盖盖玻片，避免产生气泡。使用配备有 UV 或蓝色激发光源（358 nm 左右）的荧光显微镜观察，DAPI 的发射光谱峰值约为 461 nm，呈现亮蓝色荧光。

-20℃，避光，有效期12个月。

1、荧光染料都存在淬灭的问题，建议染色后尽快检测。
2、避免反复冻融，否则容易失效。
3、DAPI对人体有刺激性，请注意适当防护。
4、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

DAPI Staining Solution

二甲基甲酰胺溶液