- T7 RNA 聚合酶
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T7 RNA 聚合酶
产品描述 描述 本产品是大肠杆菌重组表达来源的噬菌体T7 RNA聚合酶，以含有T7启动子序列（5’-TAATACGACT CACTATA-3’）的双链DNA为模板，以NTP为底物，合成与启动子下游的反向单链DNA互补的RNA。双链线性平末端或5’突出末端DNA均可作为T7 RNA聚合酶的底物模板，因此线性质粒、PCR产物均可用作体外合成RNA的模板。
产品组成：编号 组分 100KU 250KU 1 T7 RNA polymerase 400 μL 1 mL 2 10×Transcription Buffer 1 mL 1 mL×2 来源 携带T7 RNA聚合酶基因的E. coli活性 250 U/μL
使用方法 应用实例（体外转录实验，推荐体系）：
需自备试剂：
无酶无菌水（#abs9259），GTP Sodium salt solution（#abs60164），假尿苷三磷酸na盐溶液（abs60155），N1-甲基-假尿苷三磷酸na盐溶液（#abs60156），CTP Sodium salt solution（#abs60163），Abs Cap AG（#abs60182），三磷酸腺苷钠溶液（#abs60542）
1、在RNase free离心管中配制如下混合液组分 体积（μL） 无菌无酶水 Up to 20 Cap AG（100 mM）（#abs60182） 2 10×Transcription Buffer 2 CTP (100 mM )（#abs60163） 1.3 GTP(100 mM)（#abs60164） 1.3 ATP(100 mM )（#abs60542） 1.3 N1-Methyl-pUTP (100 mM )（#abs60156） 1 模板 DNA 1μg T7 RNA Polymerase (250 U/μL) 1 注：
a. 反应于室温配置。
b. 短转录本（<100nt），模板可使用 2-4μg，转录时间增至 4-8 个小时。
c. 长转录本（>1000nt），建议使用质粒线性化模板进行转录。
d. 建议在 PCR 仪中进行反应，热盖打开，防止长时间导致反应液蒸发。
e. 反应产物可能有白色沉淀。这是反应过程中游离的焦磷酸与反应液中的镁离子形成焦磷酸镁，不影响后续实验。如想去除，添加 EDTA 即可消失。添加 EDTA 如果影响后续实验，也可以离心回收上清。
f. 使用试剂、容器等无 RNase 污染。
2、轻轻混匀。
3、37℃ 2-3 h。
4、DNase Ⅰ处理（可选）
反应完成后，每管加入 2μL DNase Ⅰ（RNase free），37℃孵育 15min 以去除模板 DNA。
5、产物纯化
转录后的 RNA 可以选用 RNA Cleaner 磁珠进行纯化，也可以采用酚/氯仿纯化法，氯化锂沉淀法或柱纯化等，以去除蛋白、游离的核苷酸。纯化后的 RNA 经电泳检测后可进行下游实验或存储于-80℃。储存/保存方法 -20 ℃以下保存。避免反复冻融或频繁暴露于温度变化中，shou次使用时建议进行分装。产品有效期：12个月。
干冰运输。技术指标 buffer：400mM Tris-HCl，450 mMMg(CH3COO)2，20 mM spermidine，100 mM DTT注意事项 1、DNA模板的种类：推荐使用含T7启动子的线性化质粒和PCR产物作为模板。
2、转录模板的纯度会显著影响体外转录反应。在质粒DNA抽提过程中残留的RNase A会显著影响转录 RNA的质量。通过酚-氯仿抽提的质粒DNA为优良模板；PCR产物建议采用胶回收纯化后使用。
3、在20 μL反应体系中加入0.02-0.04 U无机焦磷酸酶可显著提高转录产量。
4、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。研究领域 研究领域 Drug DiscoverymRNA Drug/VaccineT7 RNA 聚合酶温馨提示：本产品仅作科研实验使用，不支持临床等研究