一、细胞冻存步骤：
1、常规方法收集对数期的贴壁细胞或者悬浮细胞于试管中。
2、根据培养细胞的密度和冻存管的大小确定所需冻存的细胞数。
3、将所需数目的细胞悬浮液置于离心管中，1000rpm离心5分钟，收集培养细胞沉淀，che底弃去离心管中的上清液。
4、加入适量的本冻存液于离心管中，使细胞浓度约为1×106-1×107/ml。轻柔地混匀细胞，制成细胞混合液。
5、将离心管中的细胞混合液分装于已标记的冻存管中。
6、密封标记后按常规操作流程依次经4℃，-20℃，-80℃直至液氮罐或用程序降温仪逐级降温冻存。

二、冻存细胞复苏步骤：
1、 从冰箱中取出冻存的细胞，立即置于37℃水浴槽中快速解冻。
2、 待冻存管中的细胞混合液wan全融化后，立即加入1ml细胞培养基于冻存管中与细胞混合，将其中的混合液移至含有约5ml该细胞培养基的离心管中，1000rpm离心5分钟，收集冻存细胞沉淀，移去上清液（注意勿将细胞沉淀倒掉）。
3、 加入适量的新鲜培养基，使用移液管缓缓加入细胞沉淀中，轻柔混匀，将混匀好的细胞移至事先准备好的培养容器中。
4、 镜检观察，待细胞状态恢复后可进行其他研究或者培养处理。

-20℃保存，有效期2年。

1、取用冻存液均要在超净工作台内无菌操作 。
2、初次使用融化后可在2-8℃保存至少1个月，少量蛋白析出不影响冻存效果。 
3、冻存时从室温可快速降到0℃，再降温时一般按每分钟降温1～2℃，待降至-80℃以下时可放入液氮中，在液氮中细胞可保存数年或更长时间.
4、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

溶液