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- SfiI
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产品描述 描述 SfiI 快速内切酶是一系列经过基因工程重组的快速限制性内切酶，适用于质粒 DNA、PCR 产物或基因组 DNA 等的快速酶切。所有快速内切酶在通用的 CutOne 或 CutOne ColorBuffer 中都具有优良的活性，能够在 5~15 分钟内完成酶切。此外，去磷酸化、连接试剂在 CutOne Buffer 中均具有 100% 活性，支持一管化反应，提升“酶切 - 修饰 - 连接"的体验。CutOne Color Buffer 包括红色和黄色示踪染料，可将产物直接用于凝胶电泳。CutOne Color Buffer 的红色染料与 2500 bp 双链 DNA 片段在 1% 琼脂糖凝胶中迁移速率接近；黄色染料与 10 bp双链 DNA 片段在 1% 琼脂糖凝胶中迁移速率接近。
识别位点：
5'...G G C C N N N N ↓ N G G C C...3'
3'...C C G G N ↑ N N N N C C G G...5'建议反应条件：
1× CutOne™ 缓冲液；
50℃温育；
参照“DNA 快速酶切流程"配制反应体系。
失活条件：
不可热失活，请使用酚氯仿抽提或柱纯化。
产品组成：组分 规格 SfiI 100 μl 10× CutOne Buffer 1 ml 10× CutOne Color Buffer 1 ml 
使用方法 使用方法
1、DNA 快速酶切流程
（1）在冰上按如下建议的加样顺序配制反应体系：组分 质粒 DNA PCR 产物 基因组 DNA ddH2O 15ul 16ul 30ul 10× CutOne Buffer 或 10× CutOne Color Buffer 2ul 3ula 5ul 底物 DNA 2ul (up to 1ug) 10ul (~0.2ug) 10ul (5ug) SfiI 1ul 1ul 5ul Total 20ul 30ul 50ul
a. 本体系适用于经过纯化的 PCR 产物酶切。未纯化的 PCR 产物具备一定的离子强度，10× Cutone Buffer 加入量可适当减少至 2 μl。但由于 DNA 聚合酶同时具有外切酶活性，会影响酶切产物，因此如下一步需进行（2）轻柔吸打或轻弹管壁以混匀（切勿涡旋），然后瞬时离心以收集挂壁液滴；
（3）50℃温育 15 min（质粒），或 15~30 min（PCR 产物），或 30~60 min（基因组 DNA）；
（4）酚氯仿抽提或柱纯化（可选）；（5） 如果使用 CutOne Color Buffer 进行酶切反应，得到的产物可以直接进行上样电泳。
2、双酶切或多酶切
（1）每种快速内切酶的用量为 1 μl，并根据需要适当扩大反应体系；
（2） 所有快速内切酶的体积总和不得超过总反应体系的 1/10；（3）如果所用的几种快速内切酶的最适反应温度不同，应先以最适温度低的酶开始酶切，再添加最适温度较高的酶，在其最适反应温度下进行酶切反应。
3、适用于质粒的扩大反应体系不同 DNA 中的酶切位点数量DNA 1ug 2ug 3ug 4ug 5ug SfiI 1ul 2ul 3ul 4ul 5ul 10× CutOne Buffer 或 10× CutOne Color Buffer 2ul 2ul 3ul 4ul 5ul Total 20ul 20ul 30ul 40ul 50ul λDNA ΦX174 pBR322 pUC57 pUC18/19 SV40 M13mp18/19 Adeno2 0 0 0 0 0 1 0 3 甲基化修饰影响
Dam Dcm CpG EcoKI EcoBI 无影响 剪切受影响 剪切受影响 无影响 无影响 在不同反应缓冲液中的活性
CutOne Buffer
Thermo Scientific
FastDigest Buffer
NEB
CutSmart® Buffer
Takara
QuickCut™ Buffer
活性 100% 100% 100% 100% 储存/保存方法 -20°C 及以下运输及保存，长期保存建议放 80°C 。有效期2年。技术指标 质量控制：
功能活性检测：
50℃下，在 20 μl 通用 CutOne 反应体系中，1 μl SfiI 能够在 15 min 内消化 1 μg pEPE DNA。
超长时间温育检测：
50℃下，在 20 μl 通用 CutOne 反应体系中，将 1 μl SfiI 与 1 μg pEPE DNA 共同温育 3 h，未检测到其他核酸酶污染或星号活性引起的底物非特异性降解。更长时间酶切可能出现星号活性。
酶切 - 连接 - 再酶切检测：
50℃下，使用 10 倍酶量的 SfiI 消化 DNA 底物，回收酶切产物，在 22℃下使用 T4 DNA Ligase (Fast) 可以将超过 95%的酶切产物重新连接。将连接产物再次回收后，使用相同的内切酶可以重新切开 95% 以上的连接产物。
非特异性内切酶活性检测：
50℃下，在 20 μl 通用 CutOne 反应体系中将 1 μl SfiI 与 1 μg 超螺旋质粒 DNA 共同温育 4 h 后，使用琼脂糖凝胶电泳检测，少于 10% 的质粒 DNA 转变成缺刻或线性状态。温馨提示：本产品仅作科研实验使用，不支持临床等研究