脂筏（lipid raft microdomains, LR）是细胞膜上富含胆固醇和鞘脂的微小结构域（图1），具有物理化学特性，可作为信号转导、细胞黏附和蛋白质运输等关键生物学过程的调控枢纽。近年研究发现，LR的功能异常与多种疾病密切相关，包括肿瘤、神经退行性疾病和心血管疾病等。由于其重要的病理生理作用，以LR为靶点开发新型治疗策略已成为当前研究热点。

图1 LR 的结构与组成[1]

霍乱毒素B亚单位（Cholera Toxin B subunit, CTB/ CTxb）是一种广泛应用于脂筏（Lipid Rafts）标记、内吞作用研究和神经科学的经典工具。爱必信提供的CTB 可用作神经元示踪剂、细胞膜标记、免疫佐剂等。产品经过严格优化，适用于高分辨率成像、流式分析和功能研究。

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2024年10月，上海交通大学医学院药理学与化学生物学系俞志华研究团队在Translational Neurodegeneration（IF=10.8）上发表了题为“TRPV1 alleviates APOE4-dependent microglial antigen presentation and T cell infiltration in Alzheimer’s disease"的研究论文，文中CTxb-FITC（abs80003，霍乱毒素B亚单位偶联FITC） 被用作脂筏标记物，用于研究 APOE4 对微胶质细胞脂筏结构及抗原呈递功能的影响，以及 TRPV1 通道的调控作用。

CTxb-FITC在该研究中用于标记细胞膜上的脂筏，具体功能包括：

脂筏定位：CTB结合细胞膜上的GM1神经节苷脂（脂筏的标志性成分），通过FITC荧光标记可视化脂筏的分布。

共定位分析：与MHC II分子（PE标记）的共定位实验，验证APOE4如何通过胆固醇积累促进MHC II在脂筏中的聚集，从而增强抗原呈递功能。

实验方法[2]

细胞处理：室温下，用4%多聚甲醛处理BV2小胶质细胞10分钟。

阻断与染色：

阻断液：用含5% BSA的PBS孵育，封闭非特异性位点。

染色：加入CTxb-FITC（8 μg/mL）和MHC II-PE（2 μg/mL），4°C孵育30分钟。然后再用DAPI染色细胞核。

成像：TCS SP8共聚焦显微镜拍摄，ImageJ分析共定位信号。

细胞模型：BV2小鼠小胶质细胞系，用ApoE3/ApoE4（4 μg/mL）和tau蛋白纤维（PHF）处理。

TRPV1激活：辣椒素（capsaicin, 1 μM, abs817025）预处理30分钟。

脂筏与MHC II共定位：通过CTxb-FITC（abs80003）和MHC II-PE双标，验证TRPV1激活后MHC II从脂筏的移位。

流式细胞术：分析MHC II表达。

钙成像：Fluo-4 AM检测胞内钙信号（abs47014952）。

免疫荧光：共聚焦显微镜观察脂筏、MHC II、溶酶体（LysoTracker, abs47038871）等。

1. 样品处理与固定

避免过度固定：使用4%多聚甲醛（abs9179）固定10-15分钟（室温），避免醛类过度交联破坏脂筏结构。甲醇/丙酮等有机溶剂固定会溶解脂筏，不可使用。

洗涤：固定后用 PBS（无去垢剂） 轻柔洗涤3次，防止脂筏破坏。

阻断液推荐含5% BSA的PBS 或 1-5% 血清（同源血清最佳），室温阻断30分钟。避免使用含去垢剂（如Triton X-100）的阻断液，以免溶解脂筏。

浓度优化：CTB-FITC推荐工作浓度1-10 μg/mL（需预实验确定，过高浓度增加背景），用PH7.4的PBS稀释。

孵育时间与温度：4°C孵育30分钟（减少内吞作用，保持膜表面GM1标记）。若需标记内化GM1，可改为 37°C孵育15-30分钟。

避光操作：CTB-FITC对光敏感，全程避光。

多色标记顺序：先染CTB-FITC（脂筏），固定后再染其他抗体（如MHC II）。若需胞内抗原（如溶酶体蛋白），需在CTB染色后透化（0.1% Saponin，abs815978）。

对照设置：

阴性对照：用甲基-β-环糊精（Me-β-CD，2-5 mM，abs47047467）预处理细胞耗竭胆固醇，CTB信号应消失。

阳性对照：胆固醇富集处理（如LDL加载）。

[1]基于脂筏治疗相关疾病的研究进展. 海南医学院学报

[2]TRPV1 alleviates APOE4-dependent microglial antigen presentation and T cell infiltration in Alzheimer's disease. Transl Neurodegener.