- 抗体亲和纯化填料解决方案
- 点击次数：340 更新时间：2025-02-14
一、背景介绍
◆ 蛋白A是⾦⻩⾊葡萄球菌的细胞壁中的表⾯蛋⽩，它由折叠成三螺旋束的五个同源Ig结合域组成；
◆ 蛋白G是G、C型链球菌细胞壁中的⼀种蛋⽩质；
◆ 蛋白A/G是重组蛋⽩A蛋⽩G融合蛋⽩，融合了来⾃蛋⽩A的5个Fc结合域和蛋⽩G的3个Fc结合域；
◆ 蛋白L来源于⼤消化链球菌，并通过L链相互作⽤与免疫球蛋⽩结合。
图1 抗体与抗体亲和配基的作用区域
表1 蛋白A、G、L的抗体亲和性差异分析
蛋白A
蛋白G
蛋白A/G
蛋白L
优点
结合位点在CH2和CH3结构域之间的Fc区域，以及⼈ VH3家族的Fab区内的重链
可以特异性地同免疫球蛋⽩IgG分⼦的Fc段结合⽽不影响其Fab段与抗原分⼦结合的能⼒
可以与⼈的所有IgG亚型、IgA、IgE、IgM结合。蛋⽩A/G降低了对pH的依赖，允许在pH 5-8进⾏结合
只与抗体的κ轻链结合⽽不会影响抗体的抗原结合位点。可以结合更⼴泛的抗体类别，如⼈类的IgG、IgM、IgA、IgE、IgD，以及含κ轻链(⼈类1,3,4型，⼩⿏1型)的Fab、scFv等抗体⽚段
缺点
不能与⼩⿏的IgA、IgM和⾎清⽩蛋⽩结合
不结合⽜、⼭⽺或绵⽺来源的免疫球蛋⽩
应用
免疫球蛋⽩的纯化、固定或检测领域
从⾎清中分离并纯化或去除IgG、单克隆抗体的纯化和抗原抗体复合物的分离等
⿏IgG单抗的提取和检测
从添加BSA或FCS的培养液中纯化单克隆抗体，也⼴泛⽤于基因改造⼯程化抗体的纯化分离
表2 抗体亲和配基与不同来源及亚型抗体之间的亲和⼒
种类
亚型
蛋白A
蛋白G
蛋白A/G
蛋白L
人
IgG1
+++
+++
+++
+++
IgG2
+++
+++
+++
+++
IgG3
+
+++
+++
+++
IgG4
+++
+++
+++
+++
IgM
+
-
+
+++
IgD
-
-
-
+++
IgA
+
-
+
+++
Fab
+
+
+
+++
小鼠
IgG1
+
++
++
+++
IgG2a
+++
+++
+++
+++
IgG2b
+++
+++
+++
+++
IgG3
+++
+++
+++
+++
IgM
-
-
-
+++
大鼠
IgG1
+
++
++
+++
IgG2a
-
+++
+++
+++
IgG2b
-
+
+
+++
IgG2c
+++
+++
+++
+++
牛
IgG1
+
+++
+++
-
IgG2
+++
+++
+++
-
山羊
IgG1
+
+++
+++
-
IgG2
+++
+++
+++
-
马
IgG(ab)
+
-
+
NA
IgG(c)
+
-
+
NA
IgG(T)
-
+++
+++
NA
兔
IgG
+++
+++
+++
+
猪
IgG
+++
+
+++
+++
狗
IgG
+++
+
+++
NA
鸡
IgY
-
-
-
-
注：- 表示不包含；+ 表示中标组合；+++ 表示错误组合；NA 表示不适用或数据不可用。
二、抗体亲和纯化填料参数
类别
重组蛋白A琼脂糖凝胶FF
重组蛋白G琼脂糖凝胶FF
重耐碱蛋白A琼脂糖凝胶FF
蛋白A/G琼脂糖凝胶FF
重组蛋白L琼脂糖凝胶FF
基质
4%交联琼脂糖
4%交联琼脂糖
4%交联琼脂糖
4%交联琼脂糖
4%交联琼脂糖
配基
重组金黄色葡萄球菌蛋白A，≥6mg/mL
重组链球菌蛋白G，≥6mg/mL，单点偶联
重组耐碱蛋白A，≥6mg/mL
蛋白A蛋白G融合蛋白，≥6mg/mL
重组大消化链球菌蛋白L，≥6 mg/mL
粒径范围a
45-165μm
平均粒径
~90μm
动态结合载量b
≥40mg h-IgG/mL
≥40mg h-IgG/mL
≥45mg h-IgG/mL
≥40mg h-IgG/mL
≥40mg k轻链h-IgG/mL
推荐工作流速c
60-300cm/h
60-300cm/h
60-300cm/h
60-150cm/h
60-300cm/h
最大流速与压力d
＞900cm/h
使用 pH
3-10(推荐的工作pH),3-12(短期稳定)
3-9(推荐的工作pH),2-10(短期稳定)
3-10(推荐的工作pH),3-12(短期稳定)
3-10(推荐的工作pH),3-12(短期稳定)
2-9(推荐的工作pH),15mM NaOH(CIP)
化学稳定性
在以下溶液中稳定：常用的水相缓冲液、10-100mmol/L NaOH、6mol/L盐酸胍、70%乙醇。
在以下溶液中稳定：常用的水相缓冲液、6mol/L盐酸胍、70%乙醇。
在以下溶液中稳定：常用的水相缓冲液、0.1-0.5mol/L氢氧化钠、6 mol/L盐酸胍、70%乙醇等。
在以下溶液中稳定：常用的水相缓冲液、0.1-0.5mol/L氢氧化钠、6mol/L 盐酸胍、70%乙醇等。
在以下溶液中稳定：常用的水相缓冲液、6mol/L盐酸胍、70% 乙醇。
注：
a：90%体积以上的微球在此粒径范围；
b：DBC10%测试条件为：10%流穿，6min停留时间；
c：推荐流速是指该流速可满足大部分柱高下2-6min停留时间的使用条件，并非只能在该流速范围内工作；
d：10cm柱高下的最大测试流速。
三、应用数据
图2 工艺溶剂稳定性
图3 不同蛋⽩A填料对NaOH的耐受性
图4 不同蛋⽩G填料的洗脱曲线，样品为h-IgG
图5 填料：重耐碱蛋白A琼脂糖凝胶FF(中压预装柱)(Cat: abs91003-M)；
样品：牛血清，相对于填料约20mg IgG/mL填料；
上样、结合缓冲液： 20mM PB, 150mM NaCl, pH7.4, 10CV；
洗脱缓冲液：100mM甘氨酸，pH3.0，14CV；
在位清洗(CIP)：100mM NaOH，10CV
四、爱必信抗体亲和纯化填料产品信息
货号
产品名称
规格
abs91001-F
重组蛋白A琼脂糖凝胶FF
10mL/100mL
abs91001-G
重组蛋白A琼脂糖凝胶FF(重力预装柱)
1mL/5mL
abs91001-M
重组蛋白A琼脂糖凝胶FF(中压预装柱)
1mL/5mL
abs91002-F
重组蛋白G琼脂糖凝胶FF
10mL/100mL
abs91002-G
重组蛋白G琼脂糖凝胶FF(重力预装柱)
1mL/5mL
abs91002-M
重组蛋白G琼脂糖凝胶FF(中压预装柱)
1mL/5mL
abs91003-F
重耐碱蛋白A琼脂糖凝胶FF
10mL/100mL
abs91003-M
重耐碱蛋白A琼脂糖凝胶FF(中压预装柱)
1mL/5mL
abs91003-G
重耐碱蛋白A琼脂糖凝胶FF(重力预装柱)
1mL/5mL
abs91004-F
蛋白A/G琼脂糖凝胶FF
10mL/100mL
abs91004-M
蛋白A/G琼脂糖凝胶FF(中压预装柱)
1mL/5mL
abs91004-G
蛋白A/G琼脂糖凝胶FF(重力预装柱)
1mL/5mL
abs91005-F
易洗脱蛋白G琼脂糖凝胶FF
10mL/100mL
abs91005-M
易洗脱蛋白G琼脂糖凝胶FF(中压预装柱)
1mL/5mL
abs91005-G
易洗脱蛋白G琼脂糖凝胶FF(重力预装柱)
1mL/5mL
abs91006-F
重组蛋白L琼脂糖凝胶FF
10mL/100mL
abs91006-M
重组蛋白L琼脂糖凝胶FF(中压预装柱)
1mL/5mL
abs91006-G
重组蛋白L琼脂糖凝胶FF(重力预装柱)
1mL/5mL
参考文献
[1] Arora S, Saxena V, Ayyar BV. Affinity chromatography: A versatile technique for antibody purification. Methods. 2017 Mar 1;116:84-94. doi: 10.1016/j.ymeth.2016.12.010. Epub 2016 Dec 22. PMID: 28012937.
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