- 标签蛋白纯化填料解决方案
- 点击次数：345 更新时间：2025-02-11
一、背景介绍
Ni-IDA Pharose FF是含亚氨基二乙酸(iminodiacetic acid, IDA)基团的金属螯合填料，以琼脂糖微球为基质，通过活化偶联亚氨基二乙酸(IDA)，再螯合Ni2+。适用于大部分带组氨酸标签(His-tag)蛋白的亲和层析。
Ni-NTA Sepharose FF是含次氮基三乙酸(NTA)基团的金属螯合填料， 以琼脂糖微球为基质，通过活化偶联次氮基三乙酸(NTA)，再螯合Ni2+。与亚氨基二乙酸(IDA)相比，具有更好的螯合剂、还原剂、碱性的耐受性。主要用于带组氨酸标签(His-tag)蛋白的亲和层析。
图1 Ni-IDA琼脂糖凝胶FF系列使用流程图
图2 Ni-NTA琼脂糖凝胶FF系列使用流程图
二、标签蛋白纯化填料参数
类别
Ni-IDA琼脂糖凝胶FF
Ni-NTA琼脂糖凝胶FF
基质
6%交联琼脂糖
配基
亚氨基二乙酸，~30μmol Ni2+/mL
次氮基三乙酸，~17μmol Ni2+/mL
粒径范围a
45~165μm
平均粒径
~90μm
动态结合载量b
≥40mg/mL带组氨酸标签蛋白
推荐工作流速
60~300cm/h
最大流速与压力
＞1500cm/h，0.5MPa
使用 pH
4~8.5（推荐的工作pH），3~12（长期稳定）；2~14（短期稳定）
化学稳定性
在以下溶液中稳定：常用的水相缓冲液、1mol/L氢氧化钠、8mol/L尿素、6mol/L盐酸胍、70%乙醇等
注：
a：90%体积以上的微球在此粒径范围；
b：DBC10%测试条件为：10%流穿，大肠杆菌表达带组氨酸标签的重组蛋白，6min停留时间。
三、应用数据：
图3 Lane M： Marker
Lane 1 ：Start material
Lane 2: Flowthrough 1
Lane 3: Flowthrough 2
Lane 4: Elution (20 mM Imidazole)
Lane 5: Elution (50 mM Imidazole)
Lane 6: Elution (100 mM Imidazole)
Lane 7: Elution (200 mM Imidazole)
Lane 8: Elution (300 mM Imidazole)
Lane 9: Elution (500 mM Imidazole)
填料： Ni-IDA 琼脂糖凝胶FF（重力预装柱）（Cat: abs91007-G），1mL
样品：his6 -tagged recombinant Streptococcus Protein G produced in E. coli
结合缓冲液：20mM PB, 150mM NaCl, pH7.4
洗脱缓冲液：20mM PB, 150mM NaCl, 20-500 mM Imidazole, pH7.4
图4 填料：Ni-NTA 琼脂糖凝胶FF（中压预装柱）（Cat: abs91008-M），1mL
样品：his6 -tagged recombinant Streptococcus Protein G produced in E. coli
结合缓冲液：20mM PB, 150mM NaCl, pH7.4
洗脱缓冲液：20mM PB, 150mM NaCl, 20-500 mM Imidazole, pH7.4
表 NTA系列⾦属螯合填料的耐受性
类型
Ni-NTA 琼脂糖凝胶FF
螯合剂 1 mM EDTA
螯合剂 2 mM EDTA
螯合剂 5 mM EDTA
螯合剂 10 mM EDTA
还原剂 20 mMDTT
还原剂 20 mM BME
还原剂 5 mM TCEP
还原剂 20 mM TCEP
还原剂 10 mM GSH
变性剂 8 M 尿素
变性剂 6 M 盐酸胍
去污剂 2% 曲拉通 X-100
去污剂 2% 吐温 20
去污剂 2% 吐温 80
碱 1 M 氢氧化钠
四、爱必信标签蛋白纯化填料产品信息
货号
产品名称
规格
abs91007-F
Ni-IDA琼脂糖凝胶FF
10mL/100mL
abs91007-M
Ni-IDA琼脂糖凝胶FF(中压预装柱)
1mL/5mL
abs91007-G
Ni-IDA琼脂糖凝胶FF(重力预装柱)
1mL/5mL
abs91008-F
Ni-NTA琼脂糖凝胶FF
10mL/100mL
abs91008-M
Ni-NTA琼脂糖凝胶FF(中压预装柱)
1mL/5mL
abs91008-G
Ni-NTA琼脂糖凝胶FF(重力预装柱)
1mL/5mL
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