- 分子生物学实验“酶”你不行！
- 点击次数：890 更新时间：2024-05-14
做了这么多年的分子实验，对于其中的工具酶大家都了解吗？他们的作用原理都知道吗？本期Absin分子小课堂小爱要教大家如何分清这些复杂的酶。
工具酶是一类在DNA重组过程中，用于不同DNA分子的制备、切割、修饰、扩增、核酸分子的标记以及核苷酸序列测定的酶的统称，是基因重组技术所需的工具。根据催化反应特性可分为限制性内切酶、聚合酶、连接酶、逆转录酶等多种类型。
限制性内切酶
限制性内切酶主要从原核生物中发现，以内切方式水解核酸中磷酸二酯键，对外源性的DNA进行切割、水解，被称为“基因剪刀"。限制酶来源于细菌的“限制—修饰"系统，最早发现于20世纪60年代末。根据限制酶的结构与作用方式，可将其分为Ⅰ类限制酶(TypeⅠ)、Ⅱ类限制酶(TypeⅡ)和Ⅲ类限制酶(TypeⅢ)3种类型。其中，Ⅱ类限制酶识别切割位点比较专一，且不具有甲基化酶的活性，在DNA重组中被广泛应用。
爱必信拥有不同的TypeⅡ型限制性内切酶产品：
产品优势：
1、快速：5-15min内即可完成酶切；
2、便捷：共用一种酶切Buffer，简化酶切体系；
3、兼容性高：在不同缓冲液中均具有很高活性；
4、良好酶活冗余度，轻松应对底物过量或困难模板酶切。
货号
产品名称
规格
abs60200
快速内切酶ApaLI
200T
abs60201
快速内切酶AscI
50T
abs60202
快速内切酶AvrII
25T
abs60203
快速内切酶BamHI
500T
abs60204
快速内切酶BclI
125T
abs60205
快速内切酶BglII
100T
abs60206
快速内切酶BsaI
50T
abs60207
快速内切酶BstBI
100T
abs60208
快速内切酶BstEII
100T
abs60209
快速内切酶ClaI
50T
DNA连接酶
DNA连接酶主要用于基因工程中，将由限制性核酸内切酶“剪"出的粘性末端重新组，故也称“基因针线"。作用原理为DNA连接酶催化双链DNA链一条链上切口的连接，借助ATP或NAD水解提供的能量催化DNA链的5'-Po4与另一DNA链的3'-OH生成磷酸二酯键。T4 DNA连接酶是ATP依赖的DNA连接酶，可催化双链DNA的粘性末端、平末端及RNA-DNA杂合体中单链的连接，在分子生物学中有广泛的应用。
货号
产品名称
规格
特点
abs60084
T4 DNA Ligase
500U
该酶不仅能够催化双链DNA的平末端或粘性末端之间的连接，还可以修复双链DNA、RNA或DNA/RNA杂交双链中的单链切刻。
DNA聚合酶(DNA polymerase)
DNA聚合酶以DNA为复制模板，从将DNA由5'端点开始复制到3'端的酶。DNA聚合酶的主要活性是催化DNA的合成（在具备模板、引物、dNTP等的情况下）及其相辅的活性。实验室常用的DNA聚合酶有普通耐热型Taq DNA聚合酶、高保真型DNA聚合酶。
货号
产品名称
规格
abs60251
重组高热稳定DNA聚合酶
1000U
abs60036
2×Taq PCR Mix
1mL*5
abs60056
2×Pfu Master Mix
1mL*5
abs601511
2 × 预混实时荧光定量快速PCR反应体系
1.7mL*3
逆转录酶
逆转录酶（反转录酶）又称为依赖RNA的DNA聚合酶。该酶以RNA为模板，以dNTP为底物，根据碱基配对的原则，按5'-3'方向合成一条与RNA模板互补的DNA单链，这条DNA单链叫做互补DNA (complementary DNA, CDNA)。
货号
产品名称
规格
产品特点
abs60073
Reverse Transcriptase
10000U
本酶的RNase H活性缺失，延伸能力强，可用于较长的cDNA合成，高比例的全长cDNA文库的构建以及Real Time RT-PCR反应等。
核酸酶
核酸酶主要有三类，分别是：
1、脱氧核糖核酸酶(DNase)：DNase只能水解DNA的磷酸二酯键。胰DNasel可切割双链和单链DNA，产物为5’-磷酸寡核首酸，牛脾DNasell降解DNA则产生3’-磷酸为未端的寡核苷酸；
2、核糖核酸酶(RNase)：将RNA降解为小片段的核酸酶；
3、非特异性核酸酶：将DNA、RNA都可进行水解。
货号
产品名称
规格
abs60539
脱氧核糖核酸酶Ⅰ
1KU
abs47047435
脱氧核糖核酸酶Ⅰ(牛胰)
100mg
abs9330
核糖核酸酶A
150uL
abs44075580
核糖核酸酶A
50mg
abs60326
DNase–Free RNA酶A
1mL
abs60157
全能核酸酶
10KU
其他酶
货号
产品名称
规格
产品描述
abs60248
双链DNA酶
50T
dsDNase也是一种核酸内切酶，能够特异性的消化双链DNA而不会消化单链DNA
abs60340
PfAgo核酸内切酶
200U
PfAgo核酸内切酶可在5’磷酸化的guide DNA引导下精准剪切单链DNA底物
abs9118
蛋白酶K
1g
主要应用于基因诊断试剂盒、基因组DNA提取试剂盒、RNA提取试剂盒中去除核酸酶和其它蛋白污染
FAQ：
1、限制性内切酶无法切割DNA有哪些原因？
a. 内切酶失活：用标准底物检测酶活性；
b. DNA不纯，含有SDS、酚、EDTA等内切酶抑制因子：将DNA过柱纯化，乙醇沉淀DNA；
c. 条件不适（试剂、温度）：检查反应系统是否最佳；
d. DNA不存在该酶识别序列：换用其它的酶切割DNA或过量酶消化验证。
2、酶切后的DNA片段连接效率低？
a. 含磷酸盐的浓度高：透析，乙醇沉淀去除磷酸盐；
b. 内切酶失活或含有ATP酶：更换内切酶；
c. 平末端连接：加大T4 DNA Ligase用量；
d. 连接缓冲液不合适：重新配制连接缓冲液。
3、脱氧核糖核酸酶I(abs60539)浓度、体积怎么换算？用于组织的解离该怎么用？
对于浓度、体积计算：本产品规格为1KU，酶活浓度是5U/mL，总体积则为200uL。根据说明书最后一个表格计算酶体积用量：例如1ugRNA，相应所需酶就是1U，1KU/1U=200uL/需要体积，最后计算得到0.2uL。对于动物组织解离，可以适用，具体操作步骤及使用量可参考网络文献。
4、pfAgo核酸内切酶buffer是否含有金属离子？
Buffer中不含金属离子，对于扩增反应没有任何影响。一般PfAgo酶可以兼容绝大多数PCR buffer，但普通Taq酶不兼容PfAgo buffer。
5、pfAgo核酸内切酶和Ago核酸内切酶（微球）有哪些差别？
两者状态不一样、保存条件不一样；检测方法、使用的效果几乎一样。
名词解释：
酶活性单位：在一定温度、PH及离子强度下，1h内酶解（切割）特定底物DNA，所需酶的量。采用国际单位（IU，简写为U）来统一表示酶活性的大小。
酶活性浓度：以每单位体积所含的酶活性单位数表示。目前几乎都习惯用U/L来表示液体中酶活性浓度。
Absin产品线：
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