生物制品是指以微生物、细胞、动物或人源组织和体液等为起始原材料，用生物学技术制备，用于预防、治疗和诊断人类疾病的制剂。当前，随着越来越多的生物制品进入治疗领域，于是生物制品与之俱来的生物安全性问题被渐渐提上日程，生物制品的质量控制也日趋严格。其中宿主细胞残留核酸由于可能会传递肿瘤或病毒相关基因，存在潜在致癌性和感染性风险。各国药品监督管理机构对生物制品中宿主细胞残留核酸的态度谨慎且明确，要求各制药企业建立详细可行、灵敏度高的检测方法，用于验证药品的纯化过程可以去除残留DNA，并对终产品的放行严格把关，避免携带外源DNA的药品流入市场。

宿主细胞残留DNA标准

各国药品监督管理机构均对生物制品中宿主细胞DNA的残留量进行了严格的限度控制以规避风险。

表1 宿主细胞残留DNA标准

除了对宿主核酸残留量有限度规定，我国对于DNA残留片段的大小也有了明文规定：2022年，我国国家药品监督管理局药品审评中心发布的《体内基因治疗产品药学研究与评价技术指导原则（试行）》中提到对于生产若使用了肿瘤细胞系致瘤细胞系或携带有致瘤基因、病毒来源序列的细胞（如HEK 293T细胞），在确保无完整活细胞残留的同时，需对DNA的残留量和残留片段大小进行控制。建议尽量将残留DNA控制在10ng/剂以内，DNA残留片段的大小控制在200bp以下。

表2 宿主细胞残留DNA片段风险因子

注：片段越长，风险因子越大。

宿主细胞残留DNA检测方法

为确保生物制品的安全性和质量，因此建立合适的宿主细胞残留DNA检测方法至关重要。《中国药典2020年版》通则3407中推荐了三种外源性DNA残留量测定方法，包括DNA探针杂交法、荧光染色法和定量PCR法。

表3 宿主细胞残留DNA检测方法

其中定量PCR法因其检测特异性高、灵敏度高、重现性好、通量高、耗时短等优点现已成为生物制品工艺研究和产品质量控制的检测方法。爱必信最终选择更准确、可靠、科学的荧光探针（TaqMan®）qPCR法作为细胞残留DNA检测的方法。推出了一系列宿主细胞残留核酸定量检测试剂盒，能够专一快速的对中控样品或原液成品中宿主细胞残留核酸进行准确定量，灵敏、准确和定量下限，能满足病毒疫苗生产、重组蛋白药物纯化、细胞治疗和疫苗研究中缓解PBMC细胞结团以及慢病毒的大规模纯化等工业客户的工艺研究和质控需求。

图 荧光探针（TaqMan®）qPCR法

宿主细胞残留DNA检测流程

宿主细胞残留DNA检测流程主要包含宿主细胞残留DNA提取（磁珠法）和宿主细胞残留DNA定量检测（荧光探针（TaqMan®）qPCR法）。

图 宿主细胞残留DNA检测流程

宿主细胞残留核酸提取

宿主细胞残留DNA（磁珠法）样本前处理试剂盒（abs60544）用于生物制品样本前处理，精准抽提各种生物制品中宿主细胞残留DNA。搭配宿主残留DNA/DNA片段检测试剂盒使用。

产品优势：

1）灵敏度高：灵敏度可达0.03pg/uL，回收率可达70-130%，符合国家药典标准；
2）通用性强：可手动提取、可配合全自动核酸提取仪自动化提取，满足高通量；
3）适用性强：适用于E.coli、HEK293、Vero、CHO等多种宿主DNA样本；
4）操作便捷：消化时间仅15min，配合核酸提取仪1h内完成整个提取过程。

产品信息：

宿主细胞残留核酸/DNA片段检测

产品优势：

1）快速便捷：方便操作，1h出结果；
2）稳定性高：受环境影响较小，保质期内性能稳定；
3）精密度高：各浓度检测值CV<15%；
4）专一性强：考察生物制品生产中常用的DNA对检测试剂盒的干扰，干扰组应与对照组重合，未见干扰。

产品信息：

[1] State Administration for Market Regulation. Administrative measures for the batch release of biological products[S].2020-12-11

[2]《体内基因治疗产品药学研究与评价技术指导原则（试行）》，国家药品监督管理局药品审评中心，2022年5月

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