- IHC专题——抗原修复
- 点击次数：1312 更新时间：2023-02-06
在样本制备的过程中，往往会应用一些试剂（如多聚甲醛、福尔马林等）对新鲜组织进行处理，这个过程可能导致抗原位点被封闭，为了避免影响后续免疫染色的效果，我们需要先对切片进行抗原修复。对于石蜡切片来说，抗原修复是必须的步骤，常用的方法有酶消化法和热修复法。
1、酶消化法
作为最早的抗原修复方法，常用的消化酶有三：胰蛋白酶、胃蛋白酶、蛋白酶K。但酶的作用极易受温度影响，如果消化不足，则无法充分暴露出抗原位点，过度的消化又会破坏组织结构，影响最后阳性信号的判读，因此在后续的发展中，酶消化法渐渐被热修复技术所替代，但对于个别抗原，如免疫球蛋白、补体，以及在甲醛固定、石蜡包埋的肾活检中，酶消化法依旧不可替代。
2、热修复法
抗原热修复是采用高温、高压方法配合合适的抗原修复液，使得被固定液封闭的抗原位点重新暴露，提高抗体的阳性检出率。
常用的抗原修复液有两种：柠檬酸钠缓冲液（pH=6）、EDTA缓冲液（pH=8或9），一般来说一抗的说明书都会写明需要选择哪种修复液。如果说明书没有推荐，柠檬酸钠缓冲液能够适配大部分的抗体，EDTA缓冲液相对修复效果更强，但阳性增强的同时也会提高非特异背景，一些比较难表达的抗体可以选择EDTA缓冲液。
常见热修复方法对比 热修复方法
微波热修复
水浴热修复
高压热修复
操作
在染色盒中加入抗原修复液，放入切片，置于微波炉中高火煮沸，低火维持15min后取出染色盒，冷却至室温
在染色盒中加入抗原修复液，放入切片，置于水溶锅中加热，其间不断用温度计测其温度，待抗原修复液的温度达到有效温度（92℃↑），维持40min后取出染色盒，冷却至室温
在染色盒中加入抗原修复液，放入切片，置于高压锅内加热至饱压后继续加热5min，关闭电源，10min后取出染色盒，冷却至室温
优点
加热的时间和温度都可以有所调整
温和，均匀，不易脱片，对组织形态结构影响少
受热均匀，暴露抗原位点效果好，受环境条件影响小，可重复性高
缺点
时间长，修复液容易蒸干，需要及时观察补充；受热容易不均匀，沸腾易导致脱片；不同微波炉功率有差异，难以标准化
需要较长时间；染色盒材料不同，热传导性不同，会影响加热效果，容易出现抗原表达弱、阳性率低的结果
易导致脱片；使用高压锅要小心蒸汽烫伤，使用要规范谨防锅内蒸汽过饱和引发事故
小爱温馨提示，没有哪一种抗原修复液或者修复方法能够适配所有的抗体和样本，最佳条件还是需要在摸索实践中确定哦！
IHC全套解决方案推荐 任选5件，即享八折！！！
分类
货号
品名
规格
货期
固定
abs9179
4%多聚甲醛/通用型组织固定液
500ml
现货
抗原修复
abs9249
柠檬酸钠-EDTA抗原修复液(40×)
100ml
现货
abs9207
冰冻切片快速抗原修复液(5×)
100ml
现货
abs9208
细胞爬片抗原修复液（1X）
100ml
现货
abs9247
EDTA抗原修复液(50×)
100ml
现货
abs9342
Tris-EDTA抗原修复液(10×,pH9.0)
100ml
现货
abs9248
柠檬酸钠抗原修复液(50×)
100ml
现货
abs9336
胃蛋白酶抗原修复液
100ml
现货
细胞通透（胞内指标）
abs9149
Triton X-100/曲拉通X-100
100ml/500ml
现货
淬灭
abs9333
过氧化物酶封闭液(H2O2法)
100ml
现货
abs9152
吐温-20
500ml/2.5L
现货
封闭
abs933
Goat serum
10ml/50ml
现货
abs935
驴血清
50ml
现货
abs9157
牛血清白蛋白 (BSA)
100g
现货
一抗
多指标IHC专用一抗（CD3、CD8、CD4、FOXP3、KI-67......）
1-2周
abs9299
一抗二抗稀释液
100ml/1L
现货
二抗
即用型二抗试剂盒（abs957、abs996、abs997、abs998）
现货
HRP二抗
现货
显色液
abs9210
DAB 显色试剂盒（棕黄色，IHC）
1kit
现货
abs9211
DAB 显色试剂盒（蓝紫色，IHC）
1kit
现货
复染（可选）
abs9214
改良型Mayer's苏木素染液
100ml/500ml
现货
封片（DAB显色）
abs9177
中性树胶
100ml
现货
缓冲液
abs962
1×PBS缓冲液
500ml/500ml*10
现货
abs952
10*TBST
100ml/1L
现货
abs9340
PBST(1×,pH7.4)
500ml
现货
组化笔
abs929
PAP Pen 组化笔
1支
现货