- SH-SY5Y细胞培养攻略
- 点击次数:791 更新时间:2023-01-19
人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y) 是于1970年建自骨瘤转移灶的神经母细胞瘤 SK-N-SH细胞系经3次克隆后的亚系(SK-N-SH→SH-SY→SH-SY5→SH-SY5Y)。该细胞的密度可高达106 cells/cm2,具有中等水平的多巴胺β羟化酶的活性。基本形态上皮样,多数贴壁,少数悬浮; 营养体系:推荐DMEM:F12(abs9561)+10%FBS(abs972)+1%P/S(abs9244)。
表1 SH-SY5Y细胞基本信息
SH-SY5Y(人神经母细胞瘤细胞)
形态
上皮样
生长特性
多数贴壁,少数悬浮
营养体系
DMEM:F12(abs9561)+10%FBS(abs972)+1%P/S(abs9244)
图1 SH-SY5Y(人神经母细胞瘤细胞)
首先,我们讨论的是SY5Y五天传一代算不算正常?SH-SY5Y 增殖缓慢,再加上喜欢聚团生长,镜下观察融合率不高,但细胞簇实际密度大,需要5-7天才能达到80%以上的融合率,所以5-7天传一代很正常(如图2所示,融合率约为70%的SY5Y)。如果细胞培养达到一周都无法传代,建议把细胞消化下来,接种到更小的孔板中,增加细胞密度,促进细胞生长。
接下来我们讨论第二个话题SY5Y悬浮细胞过多正不正常?SY5Y的生长特点为大部分贴壁,呈上皮样,有短触角延伸出来,倾向于成簇生长,容易成团;少部分悬浮,圆润有光泽。 如果SY5Y出现大量悬浮是不正常现象。如图3所示,悬浮细胞居多的SY5Y。
图2 悬浮细胞居多的SY5Y
如何解决这种情况呢?如果贴壁细胞生长状态良好、密度适中,可以舍弃悬浮细胞;如果贴壁细胞很少,用胰酶消化并离心,将细胞用新鲜的完培重悬并接种到培养瓶,隔段时间观察细胞是否贴壁。最后我们讨论一下不同营养体系培养的SY5Y形态差异大不大。我们对比了两种营养体系培养的SY5Y细胞形态。体系一是DMEM+20%FBS-热灭活,体系2是DMEM-F12 + 10%FBS(如图4所示)。在培养的第2天和第5天进行了相应的形态比较。传代第2天,低密度下,两种营养体系培养的SY5Y形态没有明显区别,均为少数悬浮,多数呈上皮样,有短触角延伸出来,倾向于聚团生长;传代第5天,体系2培养的SY5Y团块话过于严重,细胞黏在一起,细胞轮廓难以分辨清楚,体系1细胞有略微聚团(SY5Y本身有聚团生长特性),细胞形态正常。体系1更适合细胞增殖。
图3 两种营养体系培养的SY5Y形态对比图(两种营养体系所用血清批号一致)
本期讲解就到这里了,下一期您想了解哪种细胞的培养攻略呢?欢迎留言评论哦。如有细胞培养问题,欢迎扫码加我微信哦。Absin(优宁维-爱必信)-小武
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