技术文章更多>>
- mRNA疫苗研究明星爆品——T7 RNA聚合酶
- 点击次数：2074 更新时间：2021-12-03
- T7 RNA Polymerase，即T7 RNA聚合酶，是T7噬菌体DNA编码的酶，对T7启动子序列具有高度特异性。本酶是依赖于DNA的RNA聚合酶，具有 5′→3′的RNA聚合酶活性，可以催化单链或双链DNA T7启动子下游NTP的掺入，合成与T7启动子下游的模板DNA互补的RNA。产品特点：
该酶对T7启动子具有高度特异性，不识别其它生物来源的启动子。可以识别修饰的核苷酸，例如生物素标记、荧光素标记、放射性同位素、地高标记dNTP，用于各种标记RNA的合成，进行下游实验。
质量保证：
1.SDS-PAGE胶检测仅可见清晰单一的目的条带，毛细管电泳检测纯度在95%以上；
2.酶动力学实时荧光法显示无DNA酶及RNA酶污染；
3.光度测定法显示内毒素含量≤10 EU/mg。
纯度验证
RNA酶残留定量检测T7 RNA聚合酶 RFU值 RFU平均值 CV% Ratio DNA酶残留定量检测 T7 A 6730 7112.5 16.914 6.65 7495 T7 B 6188 6204 0.731 5.8 6220 T7 absin 5991 6218 10.352 5.81 6445 RNA酶残留定量检测 T7 A 18726 17918 6.3773 1.1 17110 T7 B 53599 41543.5 41.039 2.56 29488 T7 absin 22545 21289.5 8.34 1.31
应用实例
【RNA体外转录合成】
1. 在RNase free的离心管中加入右侧表格中各组分配制反应体系
2. 将上述反应液混合均匀，低速离心至管底，37℃孵育4个小时。若转录本长度小于100 nt,增加反应时间至4-8个小时；
3. 转录后取样品进行凝胶电泳，取样1µL稀释到5 µL,然后用1%的琼脂糖凝胶进行检测，以确定转录是否成功.
4. 反应完成后，加入DNase 1 (RNase free) , 37 ℃孵育30 min以去除模板DNA.
注：
(I)为了特定区域的有效转录，建议在其区域下游把模板DNA预先切成平端或5‘突出末端.
(2)反应体系于室温配置。由于10xTranscription Buflfer中含有亚精胺，低温下亚精胺浓度过高容易引起DNA模板沉淀，建议最后加入模板DNA.
(3)建议在PCR仪中进行反应，为防止蒸发，建议开启热盖功能.
(4)使用试剂、容器等无RNA酶污染。组分 体积 DNase RNase-Free Water Up to 20 µL ATP/CTP/GTP/UTP(100mM each) 2µL each 10x Transcription Bufler 2 µL DNA template 0.5-2µg RNase Inhibitor (40 U/µL) 0.5 µL Inorganic PyTophosphatase(0.1U/µL) 0.5µL T7RNA Polymerase (1000 U/µL) 0.2 ~ 1 µL Mg2+ (400 mM) 1 µL Total Volume 20 µL
产品信息货号 名称 规格 abs60153 T7 RNA 聚合酶 50KU/200KU/1000KU
更多相关产品推荐：货号 名称 规格 abs60154 Trizol 100ml/500ml abs9331 Trizol(总RNA抽提试剂盒) 100ml abs601510 cDNA第一链合成预混试剂（含去基因组） 50T/200T abs60036 2×Taq PCR Mix(红色染料） 1ml×5/1ml×20/1ml×50 abs601511 2 × 预混实时荧光定量快速PCR反应体系 1.7ml*3 abs601512 2 × 预混实时荧光定量快速PCR反应体系（高浓度ROX） 1.7ml*3 abs601513 2 × 预混实时荧光定量快速PCR反应体系（低浓度ROX） 1.7ml*3 abs60157 全能核酸酶 10 KU/25KU abs44075719 T4 DNA连接酶 20KU/100KU/500KU abs60200 快速内切酶ApaLI 多种规格 abs60152 牛痘病毒加帽酶 500U/2000U/10000U abs60153 T7 RNA 聚合酶 50KU/200KU/1000KU abs60155 Pseudo-UTP 10ul/50ul/1ml abs60156 N1-Methyl-Pseudo-UTP 10ul/50ul/1ml