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- 胶原酶:解离组织和单层细胞的理想之选
- 点击次数:1656 更新时间:2020-10-13
胶原酶的化学名为胶原蛋白水解酶(Collagenase),可以在生理PH和温度条件下特异性地水解天然胶原蛋白的三维螺旋结构,而不损伤其它蛋白质和组织。胶原酶的化学本质是一种蛋白质,因此,它对温度、PH和导致蛋白质变性的各种因素均非常敏感,极易受到外界条件的影响而改变其本身的构象和性质。
胶原酶是从溶组织梭状细胞芽孢杆菌提取制备的,主要水解结缔组织中胶原蛋白成分。当拟消化的组织较硬,内含较多结缔组织或胶原成分时,用胰蛋白酶解离细胞的效果较差,这时可采用胶原酶解离细胞法。胶原酶仅对细胞间质有消化作用而对上皮细胞影响不大。因此适于消化分离纤维性组织、上皮及癌组织,可使上皮细胞与胶原成分分离而不受损害。常用剂量为终浓度200U/ml(约为1mg/mL)或0.03%~0.3%。
胶原酶分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型以及肝细胞胶原酶,要根据所要分离消化的组织类型选择胶原酶类型。具体可见下面表格:
几种类型的胶原酶的区别及相关应用名称 货号 胶原酶活性 用途 胶原酶Ⅰ abs47048000 有着初始平衡的胶原酶、酪蛋白酶、梭菌蛋白酶和胰蛋白酶的活性。 用于上皮、肺,脂肪和肾上腺组织细胞的分离 胶原酶Ⅱ abs47048001 含有更高的梭菌蛋白酶活性。 用于肝脏,骨,甲状腺,心脏和唾液腺组织细胞的分离 胶原酶Ⅲ abs47048002 次级蛋白酶的含量低但是含有胰蛋白酶活性。 用于消化组织中连接部分使其成为单个细胞,用于哺乳动物组织细胞解离 胶原酶Ⅳ abs47048003 含有低水平的胰蛋白酶活性以限制膜蛋白和受体的损伤,但是含有正常水平的上述胶原酶的活性成分。 用于胰岛初次分离制备 胶原酶Ⅴ abs47048004 部分纯化,含有较高的胶原酶和酪蛋白酶活性。 用于胰腺小岛组织的分离,将结缔组织分离成单个细胞 几种类型的胶原酶的活性
名称 货号 胶原酶
u/mg dw酪蛋白酶
u/mg dw梭菌蛋白酶
u/mg dw胰蛋白酶
u/mg dw胶原酶Ⅰ abs47048000 ≥125 ≥200 ≤4.0 ≤0.5 胶原酶Ⅱ abs47048001 ≥125 ≥200 ≥3.5 ≥0.1 胶原酶Ⅲ abs47048002 ≥100 ≥50 ≤3.0 ≤0.3 胶原酶Ⅳ abs47048003 ≥160 ≥100 ≤3.0 ≤0.1 胶原酶Ⅴ abs47048004 ≥450 ≥450 ≤3.0 ≤0.3 影响胶原酶消化组织的因素及解决方案
问题 原因 解决方案 消化作用不佳 酶活性不强 在低温干燥条件下储存胶原酶。 钙离子不足 胶原酶溶液分装后冻存。 胶原酶溶液中钙离子浓度为5 mM。 酶量不足 使用更多的胶原酶。可尝试蛋白酶活性更高的酶混合物。 解离的细胞被困住 破裂细胞的DNA解离 减少搅动 加入DNA酶** 非蛋白胶不足 在消化之前充分冲洗组织*** 使用无镁离子的消化液 加入透明质酸酶 细胞死亡 蛋白酶过量 减少蛋白酶接触时间* 加入白蛋白或灭活血清 pH 改变 用缓冲液(例如HEPES)代替HCO-3. 经常检查并重新调节pH 氧气太少 给消化液通气(空气或氧气) 用更多的酶加速消化 细胞产量低 酶平衡 使用更多的胶原酶* 在胶原酶中加入弹性蛋白酶** 贴壁因子 首先灌洗组织以除去钙离子++*** 许多细胞受损 过多的蛋白酶 减少蛋白酶用量* 加入白蛋白或灭活血清 物理性损伤 非常温和地处理组织和细胞 Absin特色产品线(全部现货):
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