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- 血清那些事儿
- 点击次数：2187 更新时间：2018-03-07
- 血清小知识血清是由血浆去除纤维蛋白而形成的一种很复杂的混合物，其组成成份虽大部分已知，但还有一部分尚不清楚，而且血清组成及含量常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而异。血清中含有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、激素、无机物等，其主要作用是提供基本营养物质、提供激素和各种生长因子、提供结合蛋白、提供促接触和伸展因子使细胞贴壁免受机械损伤、对培养中的细胞的起到某些保护作用。胎牛血清应取自剖腹产的胎牛;新牛血清取自出生24小时之内的新生牛;小牛血清取自出生10-30天的小牛。胎牛血清是品质zui高的，因为胎牛还未接触外界，血清中所含的抗体、补体等对细胞有害的成分zui少。保存血清的方法长期保存的血清必须储存于-20℃或-80℃低温冰箱中，由于血清结冰时体积会增加约10%，因此，血清在冻入低温冰箱前，必须预留一定体积空间，否则易发生污染或玻璃瓶冻裂。多数情况下一瓶500ml的血清不能够一次使用完毕，所以建议一次性将血清分装成一次性能够使用完毕的体积（如50ml）。4℃冰箱中保存时间切勿超过1个月。如何解冻血清我们建议血清在2-8℃的冰箱过夜溶解，在溶解过程中需不断轻轻摇晃均匀(小心勿造成气泡)，使温度与成分均一，减少沉淀的发生。瓶装血清解冻应采用逐步解冻法：-20℃至-70℃低温冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天；然后移入室温，待全部溶解后再分装。切勿直接将血清从-20℃进入37℃解冻，这样因温度改变太大，容易造成蛋白质凝集而出现沉淀。血清中如果出现沉淀血清中沉淀物的出现有许多种原因，但zui普遍的原因是由于血清中脂蛋白的变性所造成，而血纤维蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解冻后，也会存在于血清中，亦是造成沉淀物的主要原因之一。但这些絮状沉淀物，并不影响血清本身的质量。若欲去除这些絮状沉淀物，可以将血清分装至无菌离心管内，以400g稍微离心,上清液即可接着加入培养基内一起过滤。不要以过滤的方法去除这些絮状沉淀物，因为它可能会阻塞过滤膜。血清的热灭活加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件，刺激平滑肌收缩，细胞和血小板释放组胺，激活淋巴细胞和巨噬细胞。在免疫学研究，培养胚胎干细胞（ES）细胞、昆虫细胞和平滑肌细胞时，推荐使用热灭活血清。热灭活一般是56℃、30分钟加热已*解冻的血清，加热过程中须规则摇晃均匀。除非必须，一般不建议作此热处理，因为热处理会造成血清沉淀物显著增多。有必要对血清都进行热灭活吗？实验显示，热灭活血清对大多数的细胞而言是不需要的。经过处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进，或*没有任何作用，甚至可能因为高温处理影响了血清的质量，造成细胞生长速率的降低。经过热处理的血清，沉淀物会显著地增多，这些沉淀物在倒置显微镜下观察，像是“小黑点”，常常会让研究者误以为是血清遭受污染，而把血清放在37℃环境中，又会使此沉淀物更增多，使研究者误认为是微生物的分裂扩增。因此若非必须，无需对血清进行热灭活处理。