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- WB常用试剂的参照说明书
- 点击次数：2731 更新时间：2017-06-06
- WB常用试剂使用可逆染色剂例如丽春红S检测转膜效果，检查转膜操作是否正确。PVDF膜需预先浸在甲醇中，然后浸到转移缓冲液中。代替5%脱脂奶粉，使用含0.5%脱脂奶粉或无脱脂奶粉的抗体稀释液，或更换封闭剂，减少封闭时间。使用新鲜一抗，重复使用有效浓度会降低。在孵育和洗涤液中加入温和去污剂如吐温-20。脱脂奶粉含有酪蛋白，该蛋白本身就是一种磷酸化蛋白，会结合磷酸化特异性抗体而易产生高背景。使用BSA代替奶粉作为封闭剂。WB常用试剂使用温和的去污剂如吐温-20，或更换封闭剂（常用的脱脂奶粉、BSA、血清或明胶）。参照说明书，比对免疫原序列和蛋白序列以确保抗体和目的蛋白会发生反应，设置阳性对照。每泳道蛋白上样量不低于20-30μg，使用蛋白酶抑制剂并设置阳性对照。参照凝胶的配方，在凝胶中加入适量TEMED，放置时在凝胶顶部加入适量0.1%SDS（水稀释）以防凝胶变干。